Neisseria gonorrhoeae входят в семейство Neisseriaceae, род Neisseria. Гонококки обнаружены Нейссером в 1879 г. и в честь его названо все семейство.
Морфология . Гонококки - это диплококки, состоящие из двух бобовидных кокков, лежащих вогнутыми сторонами друг к другу (напоминают кофейные зерна). Размер гонококков 1,2-1,3 × 0,7-0,8 мкм. Они полиморфны, наряду с крупными встречаются очень мелкие, неправильной формы L-формы бактерий. Гонококки неподвижны, спор не имеют. В патологическом материале (гное) обнаруживают капсулообразное вещество. Грамотрицательны. Под влиянием лекарственных и других веществ быстро изменяются: появляются грамположительные формы. В патологическом материале располагаются внутриклеточно (в лейкоците), но могут быть вне клетки. Могут находиться в виде отдельных кокков (см. рис. 4).
Культивирование . Гонококки - аэробы. Очень требовательны к питательным средам. Растут на средах, содержащих нативный белок (человеческий) - кровь, сыворотку, при температуре 37° С и рН среды 7,2-7,4. Среды должны быть свежеприготовленными и влажными. Посев следует производить сразу после взятия материала. На сывороточной среде гонококки образуют мелкие колонии 1-2 мм, прозрачные, блестящие с ровными краями, напоминающие капельки росы. На кровяной среде гемолиза не дают. В сывороточном бульоне они дают слабое помутнение и пленку, которая оседает на дно пробирки. При скудном росте через 24 ч посевы оставляют в термостате на вторые сутки.
Ферментативные свойства . Сахаролитические свойства слабо выражены. Гонококки расщепляют только один сахар - глюкозу с образованием кислоты. Протеолитическими свойствами не обладают.
Токсинообразование . В клеточной стенке гонококков имеется токсическая субстанция - липополисахарид (мало изучен).
Антигенная структура . Антигенная структура неоднородна и легко изменяется под влиянием факторов внешней среды. Общепринятого деления гонококков на серовары и серотипы пока нет.
Устойчивость к факторам окружающей среды . Во внешней среде гонококки мало устойчивы. При температуре 56-60° С они погибают. При температуре 40° С их жизнеспособность резко снижается. Низкие температуры и высушивание их быстро губят. Но в гное они сохраняются до 24 ч. Дезинфицирующие растворы - 1% раствор фенола, сулема 1:1000 убивают гонококки в течение нескольких минут. Особенно гонококки чувствительны к солям серебра - 1% раствор серебра нитрата губит их сразу. УФ-лучи убивают их в течение нескольких минут.
Восприимчивость животных . Животные не чувствительны к гонококку. Однако внутрибрюшинное введение белым мышам гонококкового токсина вызывает их гибель.
Источники инфекции . Больной гонореей человек.
Пути передачи . Контактно-бытовой (половой), реже через зараженные предметы (полотенце, губки и др.).
Заболевания у человека . Гонорея и бленнорея.
Патогенез . Естественным хозяином гонококков является больной человек. Гонококки проникают через слизистые оболочки уретры (у женщин - уретры и шейки матки). Фактором патогенности гонококков является наличие у них пилей, которые, соединяясь с микроворсинками цилиндрического эпителия, способствуют проникновению гонококка внутрь клетки эпителия, обусловливая в слизистой оболочке острый воспалительный процесс.
Клинически гонорея проявляется болями при мочеиспускании, выделениями гноя из уретры и влагалища. Заболевание протекает остро, но иногда переходит в хроническую форму. Гонококки могут вызвать гонорейный конъюнктивит - бленнорею (гнойное воспаление слизистой оболочки глаз у новорожденных). Гонококки редко проникают из уретры в другие органы, но иногда они могут быть причиной артритов, эндокардитов и т. д.
Иммунитет . Естественной резистентности к гонококкам нет. Перенесенное заболевание также не создает иммунитета. Наблюдающийся фагоцитоз носит незавершенный характер.
Профилактика . Санитарное просвещение. Повышение культурно-гигиенического уровня. Специфической профилактики нет. Для профилактики бленнореи детям сразу после рождения обязательно вводят в конъюнктивальный мешок 1-2 капли 30% раствора альбуцида.
Лечение . Антибиотики (пенициллин, бициллин, стрептомицин и др.). Применяют также сульфаниламидные препараты. При хронической форме используют гонококковую вакцину.
Контрольные вопросы
1. Опишите морфологические свойства гонококков.
2. Каковы ферментативная активность и токсинообразование гонококков?
3. Какова устойчивость гонококков. К какому препарату гонококки особенно чувствительны?
4. Какие заболевания вызывают гонококки и их патогенез.
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выявление гонококков и противогонококковых антител.
Материал для исследования
1. Отделяемое слизистой оболочки уретры у мужчин.
2. Отделяемое слизистой оболочки уретры и шейки матки у женщин.
3. Гнойные выделения из глаз.
4. Кровь для получения сыворотки.
Примечание. Для бактериоскопического и бактериологического исследования материал берут: 1) до начала лечения антибиотиками: 2) не ранее чем через 10 дней после окончания лечения антибиотиками; 3) не ранее чем через 2 ч после последнего мочеиспускания; 4) не ранее чем через 2 ч после спринцевания.
Основные методы исследования
1. Микроскопический (главным образом используется при острых формах).
2. Микробиологический.
3. Серологический.
Ход исследования
Второй день исследования
Вынимают посевы из термостата и просматривают их. Изучают колонии. Делают мазки. При наличии подозрительных грамотрицательных диплококков колонии пересевают на скошенную среду в пробирках (среда должна быть свежеприготовленной и содержать достаточное количество конденсата) и ставят пробу на оксидазу. Для этого пипеткой на колонию наносят каплю 1% раствора диметилпарафенилендиамина, колонии изменяют цвет от темно-коричневого до черного.
Третий день исследования
Вынимают посевы из термостата, делают мазки со скошенного агара, окрашивают по Граму и микроскопируют. Засевают на среды Гисса (лактозу, глюкозу, маннит и мальтозу). Эти углеводы должны содержать 30% сыворотки крови. Засеянные пробирки ставят в термостат.
Четвертый день исследования
Вынимают пробирки из термостата, при отсутствии роста оставляют их в термостате еще на 1-2 дня. При наличии роста учитывают результаты (табл. 28).
Серологическая диагностика
Третья неделя заболевания. При хроническом течении заболевания и в сомнительных случаях ставят РСК с сывороткой больного (см. главу 12). В качестве антигена используют убитую культуру гонококков, которую готовят в производственных условиях. Можно применить реакцию непрямой гемагглютинации (см. главу 12).
Контрольные вопросы
1. Какой материал служит для выявления гонококков и каким способом его получают?
2. Через сколько времени после мочеиспускания (или спринцевания у женщин) можно брать материал для исследования?
3. Какой метод исследования является основным при острой форме и какой - при хронической форме гонореи?
4. Когда и какую серологическую реакцию ставят при подозрении на гонорею?
5. От каких микроорганизмов необходимо дифференцировать гонококки?
Получите у преподавателя препарат. Изучите его и зарисуйте гонококки, расположенные внутри лейкоцита и вне его при окраске по Граму.
Питательные среды
Желточная среда . К 100 мл МПА из кроличьего мяса добавляют 15 мл желтка (свежего куриного яйца), 6 мл индикатора фенолового красного, 1,5 мл сахара, растворенного в 1 мл стерильной дистиллированной воды.
Питательная среда асцит-агар . К фильтрату бульона, приготовленного из кроличьего мяса, добавляют 2% агар, 1% пептон и 0,5% хлорид натрия. Нагревают до растворения агара, устанавливают рН 7,4-7,5, подщелачивают 20% гидроксидом натрия. Среду доводят до кипения, фильтруют, разливают в стерильные флаконы и стерилизуют в автоклаве 15 мин при 115° С.
Рецепты безасцитных питательных сред (МПА рН 7,4-7,5) .
1) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
гидролизата казеина - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки крови крупного рогатого скота - 20 мл
2) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
5% раствор гемогидролизата - 2 мл
дрожжевого аутолизата - 2 мл
сыворотки рогатого скота - 20 мл
3) мясной воды из кроличьего мяса или бычьих сердец - 100 мл
желтка куриного яйца - 10 мл
сыворотки крови рогатого скота - 20 мл
Рост гонококков на этих средах обильный. Колонии гонококка могут быть выявлены с помощью пробы на оксидазу, при которой они окрашиваются в красный цвет, переходящий в черный.
Микробиология: конспект лекций Ткаченко Ксения Викторовна
4. Гонококки
4. Гонококки
Относятся к роду Neisseria, вид N. gonorrhoeae.
Это диплококки бобовидной формы, в мазках располагаются внутриклеточно в протоплазме лейкоцитов, имеют вид кофейных зерен.
Спор не образуют, неподвижны, образуют микрокапсулу, грамотрицательные. Являются облигатными аэробами.
Гонококки исключительно требовательны к питательным средам, растут только на средах, содержащих человеческие белки (сывороточном агаре, асцит-агаре и др.). На сывороточном агаре образуют мелкие блестящие колонии в виде капель.
Биохимически малоактивны, расщепляют только глюкозу (до кислоты).
Антигены гонококков:
1) белковые антигены наружной мембраны;
2) липополисахаридные антигены клеточной стенки.
Общепринятого деления на серогруппы и серовары нет.
Факторы вирулентности:
1) адгезины – фимбрии (пили);
2) эндотоксин; подавляет фагоцитоз, обеспечивая внутриклеточное расположение гонококков;
3) ферменты агрессии – гиалуронидаза, нейраминидаза.
Патогенны только для человека. Вызывают лишь специфические нозологические формы гнойно-воспалительных заболеваний.
Гонококковая инфекция – антропонозная инфекция, источник заражения – больной человек, носительства не бывает. Путь передачи половой, возможно заражение новорожденного при прохождении через родовые пути больной матери.
Клинические формы гонококковой инфекции:
1) гонорея (урогенитальная, экстрагенитальная);
2) гонококковая септикопиемия;
3) специфический конъюнктивит новорожденных (возникает только при прохождении через родовые пути больной гонореей матери).
По длительности течения гонореи и выраженности клинических признаков различают:
1) свежую гонорею (длительность течения не более 2 месяцев):
а) острую;
б) подострую;
в) торпидную;
2) хроническую гонорею (вялотекущее заболевание продолжительностью более 2 месяцев или с неустановленным сроком).
По клиническому течению различают:
1) неосложненную гонорею (гнойное воспаление нижних отделов урогенитального тракта);
2) осложненную гонорею (процесс распространяется на верхние отделы мочеполовой системы).
Перенесенное заболевание не оставляет стойкого иммунитета.
Диагностика:
1) при острой форме:
а) бактериоскопия мазка отделяемого уретры, шейки матки;
2) при хронической форме:
а) бактериоскопия;
б) бактериологическое исследование;
в) серодиагностика – РСК;
г) иммуноиндикация.
Особенность серодиагностики: диагноз ставится качественно (по обнаружению в сыворотке обследуемого антител) по результатам однократной реакции (без парных сывороток). Это объясняется тем, что постинфекционный иммунитет при гонорее не формируется (нет постинфекционных антител).
Лечение: этиотропная терапия антибиотиками.
Гонококк (Neisseria gonorrhoeae) был открыт в 1879 г. Нейссером. Он вызывает гнойное воспаление слизистых оболочек мочеполовых путей (гонорея) и конъюнктивы глаз у новорожденных (бленнорея). Относится к роду Neisseria.
Морфология и биологические свойства . Гонококки напоминают кофейные зерна или бобы. Это парные кокки, обращенные друг к другу вогнутыми сторонами. Размер их в среднем 0,7X1,3 мкм. В гнойном отделяемом располагаются в цитоплазме лейкоцитов, сохраняя там жизнеспособность (явление незавершенного фагоцитоза). В чистой культуре имеют вид круглых или бобовидных кокков, разных по величине, расположенных беспорядочно. Хорошо красятся всеми анилиновыми красками.
Грамотрицательны. Внутриклеточное расположение, бобовидная форма и грамотрицательная окраска составляют характерную триаду свойств, которыми гонококки отличаются от других диплококков. Однако под действием лекарственных средств и при хроническом течении болезни они могут изменяться: наряду с грамотрицательными встречаются грамположительные гонококки неправильной формы, разной величины. При этом могут образовываться L-формы гонококка. Они обычно шаровидной формы и разных размеров: наряду с крупными встречаются очень мелкие. Спор, не образуют, неподвижны. В патологическом материале вокруг гонококка образуется слизистое капсулоподобное вещество. Аэробы. К питательным средам очень требовательны. Растут на средах, содержащих нативный человеческий белок (кровь, сыворотка, асцитическая жидкость), при рН 7,2— 7,4, с обязательным добавлением витаминов. Обязательное условие культивирования — достаточная влажность Среды И присутствие СО,2. Рост происходит в пределах 30—39°С при оптимуме 37°С. На асцит-агаре колонии мелкие (1—2 мм), напоминающие капельки росы; иногда образуются дочерние колонии. На асцитическом бульоне дают слабое помутнение, образуют пленку, которая оседает на дно пробирки. Из углеводов разлагают только глюкозу. На кровяном агаре гемолиза не дают. Экзотоксина гонококки не образуют. При разрушении клетки выделяют эндотоксин, введение которого внутрибрюшинно белым мышам вызывает их гибель.
Устойчивость. Гонококк малоустойчив во внешней среде. При 40°С гибнет в течение 3—6 ч, а при 56°С — в течение 5 мин. Не переносит охлаждения. В гное может сохраняться до 24 ч. Особенно чувствителен к солям серебра: в растворе 1: 6000 нитрата серебра погибает в течение 1 мин. Высокочувствителен к пенициллину, стрептомицину, но в процессе лечения быстро приобретает устойчивость к ним.
Антигенная структура. Неоднородна, легко меняется под влиянием антибиотиков, условий внешней среды, хронического течения болезни. Групповая углеводная С-субстанция, общая с менингококками и пневмококком III типа. Выделены специфические типовые протеиновые антигены, по которым различают три типа гонококков.
Патогенез и клиника. Гонореей болеет только человек. Животные в естественных условиях невосприимчивы к гонококку. Заражение гонореей обычно происходит половым путем. Дети заражаются через предметы обихода (ночной горшок, полотенце, губка). Инкубационный период при гонорее 3—7 дней, реже 10—15 дней. Попадая на слизистые оболочки мочеполовых путей, гонококк размножается и проникает в подслизистую соединительную ткань. Наиболее часто поражаются уретра и шейка матки. Процесс может распространяться вглубь по лимфатическим путям. Клинически гонорея проявляется болями при мочеиспускании, чувством тяжести внизу живота, выделением гноя из уретры и влагалища и другими симптомами. Изредка гонококк может распространяться с током крови в различные органы, оседая в суставах, сердечных клапанах. Возможен сепсис. При бленнорее новорожденных возникает гнойное воспаление слизистой оболочки глаз.
Иммунитет. Врожденный иммунитет к гонококку у человека отсутствует. Перенесенное заболевание не предохраняет от повторного заражения. Фагоцитоз при гонорее носит незавершенный характер: гонококки не только сохраняются в лейкоцитах, но размножаются и могут переноситься ими в различные органы.
Микробиологическая диагностика. Исследуют отделяемое уретры, влагалища, шейки матки, при бленнорее — гнойные выделения конъюнктивы глаза. При хронической гонорее исследуют также мочу. Основной метод лабораторной диагностики — микроскопия исследуемого материала. Наличие характерной триады признаков дает основание поставить лабораторный диагноз гонореи. Однако однократное обследование больных иногда бывает недостаточным. Для улучшения диагностики больным, у которых не обнаружен гонококк, рекомендуют проводить провокацию (инъекция гоновакцины, смазывание очагов поражения 1% люголевским раствором на глицерине), а затем ежедневно 3—7 дней бактериологическое исследование отделяемого из очагов поражения. В случае хронического течения инфекции, а также при острой гонорее, леченной антибиотиками, микроскопический метод может не дать положительных результатов, поэтому прибегают к микробиологическому исследованию патологического материала.
Производят посев на свежеприготовленный сывороточный, кровяной или асцит-агар. Наряду с этим, начиная с 3-й недели заболевания, проводят серологическое исследование: ставят реакцию связывания комплемента (реакция Борде — Жангу) с сывороткой крови больного и гонококковым антигеном. Иногда прибегают к постановке кожно-аллергической пробы с гонококковой вакциной. Однако эта реакция может быть положительной в течение многих лет после перенесенного заболевания.
Профилактика и лечение . Профилактика сводится к санитарно-просветительной работе среди населения, своевременному выявлению и лечению больных. Специфическая профилактика не осуществляется. Для профилактики бленнореи новорожденным в конъюнктивальный мешок вводят по 1—2 капли 30% раствора альбуцида.
Для лечения применяют антибиотики (пенициллин, стрептомицин и др.) и сульфаниламидные препараты. Правильное их назначение излечивает гонорею. При хронической гонорее используют также гонококковую вакцину.